JF5298 2×CTAB提取液 产品手册
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发布时间:2023.07.19 新闻来源:品科研-生物试剂,化学试剂,科学服务试剂超市-河北品科研生物科技有限公司 浏览次数:251 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
产品介绍 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),可以用于多种不同类型植物样品DNA的提取,获得的量很高,虽然纯度一般,但是足够用于大多数分子生物学实验。CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 产品名称:2×CTAB 提取液 主要成分:CTAB、Tris-HCl、EDTA、NaCl 产品名片
产品应用场景 一、试剂准备 1、氯仿-异戊醇混合液(24:1)。96mL氯仿加4mL异戊醇混匀。 2、65℃预热CTAB溶液后将1mL还原剂加入CTAB溶液中(按照500:1体积比混合,建议按需配制,请勿多配)。 二、操作步骤 1、液氮研磨0.1g左右植物组织,转移到1.5mL离心管中,加入700uL2×CTAB提取液(已加入还原剂)。或者液氮研磨之后,在研钵中加入700uL2×CTAB提取液,然后吸取到1.5mL的离心管中(建议总体积不要超过1mL) 2、将离心管置于65℃水浴30min-1h,期间每隔10min左右轻轻晃动离心管。 3、水浴完成后冷却2min,加入0.5mL的氯仿-异戊醇混合液,剧烈震荡混匀。10000-12000rmp离心5-10min。 4、取上步离心管中上清液到新的离心管中。 注意:上步离心后应该会分三层:上层为水相,中间为蛋白和植物碎片,下层为有机相。吸取时避免触及蛋白和有机相。如不小心吸取到中下层,或者中间层较厚,建议少吸取水相,或吸取之后再加入500uL氯仿-异戊醇混合液,重新混匀离心取上清。 5、在上清中加入等体积的异丙醇,颠倒混匀。(或加入2倍体积的无水乙醇和1/10体积的3MpH5.2的乙酸钠)。置于-20℃沉淀30min以上,12000rmp离心10min,弃上清。 6、 沉淀用75%乙醇洗涤1次,12000r/min离心3-5min,弃上清,沉淀自然干燥后溶于50uL去离子水或者TE中,加入1uLRNase(20 ug/mL),37摄氏度温育30 min。 7、置于-20℃保存。 三、备选方案 1、可以加入适量PVP去除多糖多酚污染。PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖。 2、可以在加入CTAB提取液之后震荡混匀,5000rmp离心2min取上清,沉淀为未研磨充分的碎片或者不溶物。然后在上清中加入氯仿-异戊醇混合液纯化,可以有效去除未裂解的植物碎片。 3、可以在加氯仿-异戊醇混合液之前,加入tris酚(pH>7.8)-氯仿混合液震荡离心取上清后,再用氯仿-异戊醇混合液纯化。可以有效去除蛋白污染。 四、常见问题 问题一:DNA样品不纯,抑制后续酶解和PCR反应。 原因: 1.DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质 2.DNA在溶解前,有酒精残留,酒精抑制后续酶解反应 3.DNA中残留有金属离子 对策: 1.重新纯化DNA,去除蛋白、多糖、多酚等杂质(具体方法见前) 2.重新沉淀DNA,让酒精充分挥发 3.增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次) 问题二:DNA降解,DNA提取量少。 原因: 1.实验材料不佳或量少 2.破壁或裂解不充分 3.沉淀不完全 4.洗涤时DNA丢失 对策: 1.尽量选用新鲜(幼嫩)的材料 2.动植物要匀浆研磨充分;G+菌、酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁 3.高温裂解时,时间适当延长(对于动物细胞、细菌可增加裂解液的用量) 4.低温沉淀,延长沉淀时间 5.加辅助物,促进沉淀
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JSENB品牌简介
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