【产品组成】

【产品简介】

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（缩写为X-Gluc）分解为蓝色物质，其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因广泛用作转基因植物的报告基因，尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化实验中广泛应用。简言之，GUS能与显色底物X-Gluc反应，显现蓝色，因而可以通过组织化学染色定性的研究GUS的表达水平和表达模式。

本试剂盒包含 GUS 染色的全部试剂，使用方便，现将 X-Gluc 溶剂加入X-Gluc 干粉内混匀即为染色液浓缩液，再将染色液浓缩液和缓冲液按照比例混合即配成 GUS 染色液。

【保存】

X-Gluc 干粉-20℃保存，其它组分2-8℃保存，保质期2年。

【使用方法】

1、GUS 染色液配制

X-Gluc 溶剂室温或 40℃水浴融化后，吸取 1 mL X-Gluc 溶剂加入到 1 管X-Gluc 干粉（50 mg）中，震荡混匀溶解，即得 50×GUS 染色浓缩液。

大包装需要自行称量分装，也可以一次性配制。

新鲜配制的染色浓缩液是无色的，-80℃避光可长期保存，-20℃避光保存30 天。X-gluc 溶液稳定性较差，长期保存建议按照需要分装到棕色管里，-80℃避光保存。正常的 X-gluc 溶液颜色为无色，如果溶液变为红色或棕色，表明溶液失效。

使用前将 GUS 染色浓缩液用 GUS 染色缓冲液稀释 50 倍，即配成 GUS 染色工作液。如将0.1mLGUS染色浓缩液加入到 5 mL GUS 染色缓冲液中混匀，即配成 5 mL GUS 染色液。

该染色液最好现用现配，可以-20℃保存 2-3 天

2、染色步骤

（1）染色：将待测样品浸到GUS染液中，37℃保温箱中放置24 h~36 h。

（依据转化基因启动子强度以及材料的幼嫩程度和角质层厚度）

（2）脱色：将叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性对照材料呈白色。

部分绿色材料脱色较慢，可在无水乙醇或80%丙酮中脱色2-3次，至阴性对照材料为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点很稳定，在酒精中不褪色。

若要进行拍照，应用含有30%甘油和70%乙醇的溶液进行保存。

肉眼或显微镜下观察，拍照记录，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。

【注意事项】

用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1-3 mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。